SUMO蛋白酶识别完整的含有100个氨基酸的SUMO（Small Ubiquitin-like Modifier）标签蛋白，并能高效地把SUMO从融合蛋白上切割下来。与EK和TEV等蛋白酶的识别位点相比，由于其识别序列长，所以SUMO蛋白酶酶切反应有很高的特异性，且在较宽范围的反应环境体系中保持较高的活力，例如温度（4-30℃）、pH（5.5-9.5）等。SUMO蛋白酶还具有多聚His标签，便于使用亲和层析的方法，去除SUMO蛋白酶，纯化目的蛋白。
产品组分
编号 | 组分名称 | 产品货号/规格 |
20410ES60 （100 U） | 20410ES70 （500 U） | 20410ES80 （1000 U） |
20410-A | SUMO Protease（1U/μL） | 100 μL | 500 μL | 1000 μL |
20410-B1 | 10×Protease Buffer（-salt） | 200 μL | 1000 μL | 2 mL |
20410-B2 | 10×Protease Buffer（+salt） | 200 μL | 1000 μL | 2 mL |
注：该酶酶活定义使用10×Protease Buffer（-salt）。SUMO Protease在10×Protease Buffer（-salt）中活性相对较高，但对于不稳定的底物应选择10×Protease Buffer（+salt），我们也提供了+salt的反应缓冲液20410-B2，请根据您的实验选择正确的缓冲液。20410-B2：500 mM Tris-HCl, pH 8.0、2% Igepal (NP-40)、1.5 M NaCl、10 mM DTT；20410-B1：500 mM Tris-HCl, pH 8.0、2% Igepal (NP-40)、10 mM DTT；
产品性质
中文别名（Chinese synonym） | SUMO蛋白酶 |
英文别名（English synonym） | SUMO Protease |
来源（Source） | 大肠杆菌表达 |
标签（label） | 多聚His标签 |
纯度（Purity） | 经SDS-PAGE及HPLC分析，纯度> 90% |
分子量（Molecular weight） | 26.55 kDa |
储存缓冲液（Buffer） | 25 mM Tris-HCl, pH 8.0、0.1% Igepal (NP-40)、250 mM NaCl、500 μM DTT、50% 甘油 |
酶活定义（Unit Definition） | 30℃，SUMO Protease 1小时酶切5 μg含有酶切位点的融合蛋白，酶切效率达85%以上所需的酶量定义为1个酶活力单位，即1U。 |
运输和保存方法
干冰运输；-80℃保存,有效期1年；避免反复冻融。
使用方法
1.在EP管中配制如下反应体系
组分 | 体积（反应体系可等比例缩减） |
融合蛋白 | 50 μg |
10×Protease Buffer（常规条件下B1） | 20 μL |
ddH2O | to 200 μL |
SUMO Protease （1U/μL） | 10 μL |
Total volume | 200 μL |
2. 30℃孵育，在1、2、4和6小时分别吸出20 μL上述反应液，置于单独的EP管中。
3. 向上述EP管中加入20 μL 2×SDS Loading Buffer，置于-20℃。
4. 样品全部反应完毕后，样品煮沸5 min，取30 μL进行SDS-PAGE分析。确定最佳反应时间。
【注】如融合蛋白要求低温处理，可将反应液置于4℃，延长反应时间，并增加SUMO酶用量，以保证酶切效果。
表1. 不同温度下SUMO蛋白酶切活性
反应时间（h） | 不同温度下剪切活性（%） |
4℃ | 16℃ | 25℃ | 30℃ |
0.5 | 48 | 73 | 83 | 88 |
1 | 60 | 87 | 90 | 93 |
2 | 71 | 94 | 94 | 95 |
3 | 74 | 95 | 95 | 95 |
注意事项
1.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2.本产品仅作科研用途！